产品目录

本制品是专门用于将质粒DNA、siRNA或mimics共同转染于同一细胞的试剂。nFect^CO Prime具有非常优异的转染性能，可将质粒DNA和siRNA高效地共转染于绝大多数贴壁细胞和原代细胞。在贴壁细胞中，质粒DNA转染效率可高达90%以上，siRNA在质粒转染阳性细胞中共转染效率可高达95%以上。nFect^CO Prime功能强大，不仅可高效转染质粒DNA和siRNA，还可高效转染mRNA、mimics、反义核酸和各种小分子DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，nFect^CO Prime采用生物可降解材料配制，对细胞的毒性很低，转染后24小时细胞死亡率不到10%。nFect^CO Prime使用也非常方便，先将转染试剂与质粒DNA和siRNA混合，再将该转染复合物直接加入培养细胞中，血清不影响其转染效果，不必刻意添加或更换培养液，操作十分简便。

• 优异的质粒DNA与siRNA共转染性能，可高效转染多种贴壁细胞和原代细胞，质粒DNA转染效率在贴壁细胞中可高达90%以上，siRNA在质粒转染阳性细胞中共转染效率高达95%以上；
  
• 共转染功能强大，不仅可将质粒DNA与siRNA共转染于同一细胞，还可共转染mRNA、mimics、反义核酸于同一细胞；
  
• 极低的细胞毒性：使用可降解生物材料，细胞毒性低，转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响。

• 首次转染，请务必进行优化实验，如24孔板质粒转染，每孔质粒用量0.8μg，siRNA用量15pmol，nFect^CO Prime可选择2.0μL、2.5μL、3.0μL进行优化。或者，每孔质粒用量0.8μg，nFect^CO Prime用量2.5μL，siRNA用量选择10pmol、15pmol、20pmol、25pmol进行优化。
  
• 在制备DNA-siRNA转染复合物时，应避免体系中存在血清，因血清会干扰nFect^CO Prime与DNA、siRNA形成复合物。培养体系中尽量不要添加抗生素，抗生素会导致培养细胞死亡。

• 细胞接种：
  
  • 转染前一天对细胞进行转接，每孔接种1.5×10⁵个细胞，使转染时细胞密度为80～90%，且生长良好（非常重要）；
    
  • 最好在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致细胞死亡。
• nFect^CO Prime转染复合物制备（该步完成后应立即进行转染）：
  
  • 在1.5mL无菌离心管中加入50μL无血清培养基，再加入适量的转染试剂，见附表。用移液器轻轻混匀，室温静置5分钟。
    
  • 在1.5mL无菌离心管中加入50μL无血清培养基，再加入适量的DNA，轻轻混匀，之后再加入适量的siRNA，见附表。用移液器再次轻轻混匀，室温静置5分钟。
    
  • 将DNA-siRNA-培养基混合物滴加至nFect^CO Prime-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀，室温静置15～20分钟，立即转染。
    注意：
    ① nFect^CO Prime-培养基混合物和DNA-siRNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。
    ② 离心管最好使用聚丙烯离心管。
• 转染：
  
  • 将步骤B制备的转染复合物滴加至培养基中，边加边轻轻晃动培养板以使复合物均匀分布。加完后，立即将培养板转入培养箱继续培养。
    
  • 培养24～48小时后观察或进行下一步实验。
    
  • nFect^CO Prime在完全培养基中仍有较高的转染效率，因此转染前后不需要换成无血清或低血清培养基。